Диагностика

Диагностика методом сухой капли крови (DBS)

Метод сухого пятна крови (DBS, Dried Blood Spots) оптимален для скрининга на редкие генетические заболевания. Метод прост и эффективен для постановки точного диагноза и используется в большинстве современных лабораторных тестов.

Метод сухого пятна крови (DBS)

Стандартный забор крови

преимущества метода DBS

Малоинвазивное вмешательство

За счет небольшого количества используемой крови, достаточно объема до 100 мкл (забор крови из пальца).

Эффективная логистика

Метод сухого пятна крови позволил существенно повысить эффективность хранения и транспортировки крови, так как высушенные образцы не требуют специального температурного режима и могут быть направлены в лабораторию, например, по почте, исключая лишние расходы на транспортировку.

Современные лабораторные тесты

Диагностику редких генетических болезней, в том числе лизосомных болезней накопления, проводят в сухих пятнах крови с помощью различных лабораторных методов:

газовая (ГХ) или жидкостная хроматография (ЖХ) в сочетании с масс-спектрометрией (МС)
иммунохимические методы
полимеразная цепная реакция (ПЦР)
секвенирование по Сэнгеру
секвенирование нового поколения (NGS)

На чём основан метод?

Метод основан на капельном нанесении крови на специальную впитывающую мембрану на фильтр-карте с последующим высушиванием пробы.

Фильтр-карта используется для забора и транспортировки биологического материала в лабораторию для анализа.

Описание фильтр-карты для забора крови:

Для приготовления DBS стандартно используется фильтр-карта №903 (Whatman) или аналогичная по своим свойствам.

Классический вариант карточки для забора крови Whatman 903

Подробнее о фильтр-карте

Способы забора биоматериала для получения сухого пятна крови

Подготовка к отбору крови стандартна

Медицинский персонал должен соблюдать правила стерильности, протирая место прокола раствором антисептика, используя одноразовые иглы-скарификаторы и перчатки. Для лучшего притока крови к месту прокола предварительно проводят растирание.

Кровь пациента по каплям наносят в центр окружности, соблюдая правило:
одна капля — одна окружность.

У взрослых пациентов кровь отбирают из пальца

У новорожденных — из пятки

Можно использовать венозную кровь в пробирке с ЭДТА

Как получить сухое пятно крови?

Получите капиллярную или венозную кровь

Нанесите капли крови на кружки впитывающей мембраны

Высушите 4 часа при комнатной температуре

Упакуйте так, чтобы образец был изолирован полностью для предотвращения контаминации

Фильтр-карта — универсальное средство для хранения и транспортировки биообразцов, полученных из капиллярной или венозной крови, так как не требует специальных условий и может транспортироваться как документы.

Метод сухого пятна крови (DBS)

Ограничения метода

Формат фильтр-карточки удобен для нанесения капиллярной крови, но при этом для корректного нанесения крови требуется соблюдать ряд условий:

Каплю крови нужно наносить 1 раз в центр круга, при этом нельзя наносить каплю в один круг дважды. Отклонение от центра приводит часто к необходимости повторного нанесения капли на ту же область, что вызывает локальное увеличение концентрации вещества на носителе и, как следствие, завышение результатов анализа, а также снижение воспроизводимости результатов.

Список сокращений

DBS — Dried Blood Spots, метод сухого пятна крови;
NGS — Next generation sequencing, секвенирование нового поколения;
ЭДТА — этилендиаминтетрауксусная кислота;
ФКУ — фенилкетонурия.

Источники

Guthrie R., Ada S. A simple phenylalanine method for detecting phenylketonuria in lage populations of newborn infants. Pediatr. 32, 1963. Vol. 32, № 3. P. 338–343.
Meesters R. J., Hooff G.P. State-of-the-art dried blood spot analysis: an overview of recent advances and future trends. Bioanalysis, 2013. Vol. 5, № 17. P. 2187–2208.
Demirev P. A. Dried blood spots: analysis and applications. Anal Chem, 2013. Vol. 85, № 2. P. 779–789.
Sharma A., Jaiswal S., Shukla M., Lal J. Dried blood spots: concepts, present status, and future perspectives in bioanalysis. Drug Test. Anal, 2014. Vol. 6, № 5. P. 399-414.
Li W., Lee M. S. Dried blood spots: applications and techniques. Wiley Series on Pharmaceutical Science and Biotechnology: Practices, Applications and Methods, 2014. 363 p.
Lehmann S., Picas A., Tiers L., Vialaret J., Hirtz C. Clinical perspectives of dried blood spot protein quantification using mass spectrometry methods. Crit. Rev. Clin. Lab. Sci, 2017. Vol. 54, № 3. P. 173–184.
Freeman J. D., Rosman L. M., Ratcliff J. D., Strickland P. T., Graham D. R., Silbergeld E. K. State of the science in dried blood spots. Clin. Chem, 2018. Vol. 64, № 4. P. 656–679.
Clinical and Laboratory Standards Institute (2007): Blood Collection on Filter Paper for Newborn Screening Programs Approved Standard — Fifth edition, CLSI Document LA4 — A5, CLSI, Wayne, Pennsylvania, 19087–1898, Vol. 27, № 20.
Uribe, R. Giugliani Selective Screening for Lysosomal Storage Diseases with Dried Blood Spots Collected on Filter Paper in 4,700 High-Risk Colombian Subjects JIMD Rep, 2013; 11: 107–116.
Yu C., Sun Q.,H. Zhou Enzymatic Screening and Diagnosis of Lysosomal Storage Diseases N Am J Med Sci (Boston). 2013; 6(4): 186–193.
Приказ Министерства здравоохранения и социального развития РФ от 22 марта 2006 г. N 185 «О массовом обследовании новорожденных детей на наследственные болезни».

Описание идентификатора

MAT-RU-2404526 - 11/24

Аккаунт с указанным адресом не зарегистрирован. Пожалуйста, зарегистрируйтесь.

Вы видите только открытые публикации. Чтобы получить доступ ко всем материалам на сайте, необходимо авторизоваться или зарегистрироваться

Источники

Поделиться

Метод сухого пятна крови — история

Внимание, вы собираетесь перейти по внешней ссылке